Identificación de las proteínas Gi/o heterotriméricas sensibles a mastoparán que inhiben a las guanililciclasas particuladas b y soluble en el músculo liso traqueal de bovinos
Identificar las proteínas Gi/o heterotriméricas sensibles a Mastoparán y asociadas al m2AchR, que inhiben a las Guanililciclasas Particulada B (NPR-GC-B) y Soluble (sGC) en el músculo liso traqueal de bovinos (MLTB). Métodos: Se utilizaron fragmentos intactos de MLTB, para determinar actividad contr...
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2021
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Adicionalmente, se utilizaron fracciones subcelulares de membrana de MLTB P1+P2 para medir la actividad de NPR-GC-B y P1+P220’’CC para medir la actividad de la sGC en presencia de péptidos C-Terminal de la subunidad a. Por último, se emplearon fracciones P1+P2 y P1+P220’’CC libre actividad del receptor muscarínico m3 (m3AchR) activadas con Mastoparán y Carbamilcolina, en presencia de anticuerpos anti-Ga-i/o y B para identificar las proteínas Gi/o asociadas al m2AchR. Resultados: se encontró que el Mastoparán en MLTB intacto inhibe parcialmente la sGC, totalmente la NPR-GC y actúa como un inhibidor no competitivo de la contracción, tales efectos son a través de proteína Gi/o, ya que los mismos son revertidos con Toxina Pertussis (PTX), adicionalmente se encontró, que Mastoparán activa a las proteínas Gi/o asociadas al m2AchR, sin activar a dicho receptor. Los resultados mostraron que las proteínas Gi/o asociadas al m2AchR que inhiben a la NPR-GC-B pertenecen a la subfamilia ao1B4, y las que inhiben a las sGC son a¡3B1 Conclusión: Las proteínas Gi/o pueden ser activadas directamente por Mastoparán, lo que puede constituir un mecanismo novedoso capaz de restituir la función moduladora que ejerce m2AchR sobre la permeabilidad de las vías aéreasIdentify the Gi /o heterotrimeric proteins sensitive to Mastoparan and associated with m2AchR, which inhibit Particulate B (NPR-GC-B) and soluble (sGC) Guanylyl Cyclase enzyme in bovine tracheal smooth muscle (BTSM). Methods: Intact BTSM fragments were used to determine contractile activity and cGMP levels in the presence of agonists and inhibitors. Additionally, subcellular membrane fractions of BTSM P1+P2 were used to measure the activity of NPR-GC-B and P1+P220''C to measure the activity of sGC in the presence of C-Terminal peptides of the a. subunit. Finally, fractions P1+P2 and P1+P220''CC free activity of the m3 muscarinic receptor (m3AchR) activated with Mastoparan and Carbamylcholine were used, in the presence of anti Ga-i / o and B antibodies to identify the Gio proteins associated with m2AchR. Results, it was found that Mastoparán in intact MLTB partially inhibits sGC, totally NPR-GC and acts as a non-competitive inhibitor of contraction, such effects are through Gi/o protein, since they are reversed with Pertussis Toxin (PTX), additionally it was found that Mastoparán activates the Gi/o proteins associated with m2AchR, without activating the receptor. The results showed that the Gi / o proteins associated with m2AchR that inhibit NPR-GC-B belong to the ao1B4, subfamily and those that inhibit sGC are ai3B1 Conclusion: The Gio proteins can be activated directly by Mastoparan, which may constitute a novel mechanism capable of restoring the modulatory function that m2AchR exerts on the permeability of the airwaysesMastoparánToxina Pertussis (PTX)Receptor Muscarínico m2 (m2AchR)Receptor Muscarínico m3 (m3AchR)Guanililciclasa Particulada B (NPR-GC-B)Guanililciclasa Soluble (sGC)Proteínas Gi/o, Péptidos C-Terminal de la subunidadPrograma de Estudios IndividualizadosFacultad de MedicinaCiencias FisiológicasTesis DoctoralIdentificación de las proteínas Gi/o heterotriméricas sensibles a mastoparán que inhiben a las guanililciclasas particuladas b y soluble en el músculo liso traqueal de bovinosThesisORIGINALwalid hassan _final publicacion.pdfwalid hassan _final publicacion.pdfapplication/pdf2692862https://saber.ucv.ve/jspui/bitstream/10872/23061/1/walid%20hassan%20_final%20publicacion.pdf3f6d8cfbd7c1f3652606b3b50a302285MD51LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-81748https://saber.ucv.ve/jspui/bitstream/10872/23061/2/license.txt8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33MD52TEXTwalid hassan _final publicacion.pdf.txtwalid hassan _final publicacion.pdf.txtExtracted texttext/plain173535https://saber.ucv.ve/jspui/bitstream/10872/23061/3/walid%20hassan%20_final%20publicacion.pdf.txt2c7df1089cca844f4fcfa0dae1e68d35MD5310872/23061oai:saber.ucv.ve:10872/230612026-03-17 03:29:14.921Saber UCVsfwrussians@gmail.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 |
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